Получение грибницы (мицелия)

15 июня 2016 - Mendal

Можно изготовить грибницу примитивными методами - когда-то это делали именно так. Конечно, эта задача по силам только тем любителям, для которых разведение грибов стало настоящей страстью. Изготавливая грибницу самостоятельно, можно не зависеть от поставщиков. Можно культивировать виды, мицелий которых достать очень трудно, и даже экспериментировать с разведением малоисследованных видов диких грибов.

Оборудование для получения мицелия

Обойдется ли самостоятельное получение мицелия дешевле, чем его приобретение, - это другой вопрос. Во-первых, даже для примитивной методики придется покупать оборудование. Во-вторых, при работе такими простыми средствами всегда случаются досадные неудачи.

Простая лаборатория мицелия

Сначала нужно организовать подходящее рабочее место. Помещение должно быть чистым и удобным для уборки. Влажность воздуха не должна быть слишком высокой, так как в противном случае вредоносные микроорганизмы развиваются очень хорошо. Оптимальна относительная влажность воздуха от 60 до 70%. Оптимальная температура - от 20 до 24 °С. Температуру в помещении можно поддерживать с помощью электронагревательного прибора. Важно, чтобы не было пыли, так как пыль - основной источник инфекции. По этой же причине нежелательны и сквозняки. Необходимая рабочая площадь составляет около 1,5 м2. Проще всего поддерживать в чистоте пластиковые поверхности. Несколько полок над рабочим столом будут кстати. На рабочем месте понадобится освещение, источник тока; хорошо, если поблизости будет вода. Для получения грибницы понадобятся: не менее 15 пробирок с подходящими целлюлозными или ватными пробками, штатив для пробирок, как минимум 1 коническая колба емкостью 500 мл с подходящей пробкой и химический стакан той же емкости. Кроме того, пипетки (10 мл), пинцет, скальпель, бактериологическая игла и инокуляционный крюк с ручкой. Еще нужны пластиковые чашки Петри, которые продают стерилизованными и в стерильной упаковке. Понадобится электрическая плита, бунзеновская или спиртовая горелка и дезинфицирующее средство, например, сагротан. Все это приобретается в специализированных магазинах. На кухне можно позаимствовать: большую кастрюлю, алюминиевую фольгу, стеклянные бутылки с широким горлом емкостью 1 л. или банки для консервирования той же емкости.

От чистой культуры к мицелию

Чтобы изготовить мицелий, для начала необходима чистая культура нужного вида гриба. Проще всего получить ее из тканевой культуры. Для этого понадобятся молодые, здоровые и по возможности свежие плодовые тела. Если перенести кусочек ткани гриба на подходящую питательную основу, вскоре из нее вырастут гифы мицелия. В качестве питательной основы используют картофельно-глюкозный агар и агар на экстракте солода. То и другое можно купить в готовом виде. В соответствующей специальной литературе можно найти подробное руководство по изготовлению питательной основы.

Стерильность работы

Перед тем как начать работу в лаборатории, нужно тщательно прибраться в помещении и прежде всего продезинфицировать рабочую поверхность 2%-ным раствором са-гротана. Чтобы не поднимать микроорганизмы в воздух, следует избегать резких движений. С культурой нужно работать организованно и быстро. Важно перед каждым этапом работы стерилизовать оборудование: пинцет, скальпель, бактериологическую иглу, инокуляцион-ный крюк, пробки и горлышки пробирок, - например, несколько раз в пламени горелки. Со стерильных чашек Петри никогда не снимают крышки полностью. Для внесения питательного раствора или кусочков ткани крышку лишь немного приподнимают.

Питательная среда

Готовую питательную среду растворяют в кипящей воде в колбе Эрлен-мейера. На каждую чашку Петри понадобится примерно 10 мл питательного раствора. Пробирки с питательным раствором (штук 10-15) должны быть приготовлены заранее и простерилизованы. Они должны быть закрыты пробками, пробки для защиты от влаги обернуты алюминиевой фольгой. Стерилизуют их в химическом стакане в течение 20 мин при 120 °С в автоклаве или в духовке. Остатки питательной среды также стерилизуют или хранят в холодильнике (в течение 1-2 суток).

После стерилизации питательную среду разливают стерильно по чашкам Петри, отмеряя стерильной пипеткой по 10 мл раствора. Если среда остыла и стала плотной, ее подогревают на водяной бане. Заливая среду в чашки, надо следить, чтобы она равномерно распределялась по дну, для этого чашку слегка вращают осторожными движениями.

Помещение кусочков ткани на питательную среду

Как только питательная среда остынет, на нее выкладывают кусочки ткани. Сначала гриб нужно вымыть и продезинфицировать 2%-ным раствором сагротана. С помощью скальпеля гриб разрезают пополам, бактериологической иглой извлекают из середины маленькие кусочки ткани и 3-4 из них помещают в центр пластинки питательной основы. Чашки Петри оставляют при комнатной температуре. Если работы вели в условиях асептики, через несколько дней появится белый пух мицелия.

Часто, однако, появляются серые, зеленые или красные плесневые грибы или слизистые колонии бактерий. Сильно пораженные чашки нужно выбросить. Чистый мицелий культурного гриба должен колонизировать по меньшей мере часть питательной пластины без загрязнения. Если через 2-3 недели он распространится по всей поверхности среды, самый трудный этап получения чистой культуры позади.

Чистые культуры

Для лучшей сохранности чистые культуры переносят на так называемый скошенный агар. Для их приготовления берут примерно 5 пробирок со стерильной питательной средой, расплавленной на водяной бане. Верхний конец пробирки кладут на лежащую пустую пробирку, чтобы среда застывала в наклонном положении.

На скошенный агар с помощью инокуляционного крюка переносят маленькие кусочки питательной среды с растущим на ней мицелием. Хорошо наклеить на пробирки этикетки с датой и названием гриба. Если работы проводили чисто, на агаре при комнатной температуре мицелий культурного гриба развивается примерно через 3 недели.

Пробирки связывают, обертывают алюминиевой фольгой и хранят в холодильнике. Спустя 3-4 мес. мицелий пересевают на свежий скошенный агар, примерно каждые 12-16 мес. необходим пересев чистых культур.

Получение грибницы

Для получения грибницы нужны злаки высшего качества. Одну часть зерен смешивают с двумя частями воды, 15 мин кипятят и после высыхания выкладывают на чистое полотенце. Зерна смешивают с 1,3% гипса и 0,3% углекислого кальция. Банку или бутылку заполняют зернами примерно на 3/4 объема. Бутылку закрывают пробкой и оборачивают фольгой, банку закрывают подходящей крышкой. Стерилизуют в духовке в течение 2 ч при 120 °С. После охлаждения в каждую банку переносят 3-4 кусочка питательной среды с проросшим мицелием. Через 3 недели при комнатной температуре зерна прорастают. Их можно использовать для инокуляции или какое-то время хранить в холодильнике. Для мицелия кольцевика нужно добавить еще один этап работы: измельчить солому на части длиной около 3 см и увлажнить. Так как впоследствии понадобится инокуляционный канал, в банку вставляют деревянную палочку диаметром около 2 см, а затем утрамбовывают вокруг нее солому. Банку закрывают и 2 ч стерилизуют. После охлаждения палочку вынимают и в образовавшийся канал насыпают зерна с мицелием; можно переносить их прокаленным пинцетом или ложкой. Потребуется еще 3-4 недели, чтобы мицелий разросся в соломе. Мицелий на зернах можно снова использовать для инокуляции зерен. Однако процесс нельзя повторять более четырех раз, так как мицелий обычно вырождается. Неопытным обучение обойдется довольно дорого. Но, немного поупражнявшись, можно добиться впечатляющих результатов.